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Please check your Internet connection and reload this page. If the problem continues, please Live-Würmer us know and we'll try to help. An more info error occurred. Diese Kulturen sind nützlich Live-Würmer das phänotypische Screening von ganzen Organismen.

Wir konzentrieren uns hier auf dieser Kulturen zu Bildschirm Chemikalien für pro-Langlebigkeit-Effekte Live-Würmer. Click Live-Würmer for the Live-Würmer version. For other languages click here. Caenorhabditis Elegans ist eine nützliche Organismus chemische Einflüsse auf die Live-Würmer zu Testzwecken. Gesamtorganismus niedermolekularer Bildschirme bieten erhebliche Vorteile für die Identifizierung von biologisch aktiver chemischer Strukturen, die komplexe Phänotypen wie Lebensdauer ändern können.

Elegans in jede Vertiefung. Dieses Protokoll nutzt Temperatur empfindliche steriler Stämme, Agar Platte Bedingungen und einfache Tier Umgang Live-Würmer die schnellen Live-Würmer hohen Durchsatz-Produktion von Live-Würmer tierischen Kulturen für das Screening zu erleichtern.

Hier wird ein Protokoll beschrieben, die Live-Würmer Hochdurchsatz-Screening von chemischen Live-Würmer für Auswirkungen auf Caenorhabditis Elegans Lebensdauer entwickelt wurde. Das Protokoll selbst ist leicht anpassbar an andere phänotypische Bildschirme, einschließlich Studien Reporter C.

Dieses Protokoll wurde erfolgreich Live-Würmer, um eine neuartige biologisch Live-Würmer Verbindung, NP1 identifizieren Nitrophenyl-Piperazin 1das stark verlängert die Lebensdauer von C. Elegans durch eine diätetische Einschränkung-Mechanismus. NP1 und eine Charakterisierung von seiner Wirkung auf Lebensdauer, einschließlich einer Beschreibung der genetischen Wege im Spiel, war zuvor Live-Würmer anderer Stelle 1 beschrieben.

Dieser Live-Würmer enthält Live-Würmer eine Live-Würmer der Ergebnisse aus eine großtechnische Umsetzung des Bildschirms. Hier beschreiben wir ausführlich viel grösseres die Methodik und das Setup des Bildschirms selbst, das ist für kleine Live-Würmer größere Anwendungen skalierbar.

Das Ziel, das zur Schaffung von dem hier beschriebenen Protokoll geführt wurde, eine C. Elegans Kultur-Plattform zu entwickeln, die für die schnelle Screening der großen chemischen Bibliotheken für neuartige biologisch aktiven Verbindungen zulässig. Diese Studie versucht stattdessen direkt für Lebensdauer Effekte auf den Live-Würmer. Bemerkenswert ist, gab Live-Würmer einige Beschreibungen in der wissenschaftlichen Literatur zum Zeitpunkt der Durchführung groß angelegte chemische Bildschirme mit C.

In der Tat schien im Vergleich zu anderen Arten von Bildschirmen 5 Live-Würmer, 6Live-WürmerLive-Würmer angelegte chemische Screening mit C.

Es gab zwei Beschreibungen der großen Skala chemische Bildschirme in C. Elegansdie als Grundlage verwendet wurden, um diesen Ansatz Würmer Sorten Foto Live-Würmer. Die erste davon war eine elegante Studie von Peter Roy Labor unter Verwendung chemischer Bildschirme Verbindungen zu identifizieren, die die Entwicklung der Tiere stören könnte.

Die Live-Würmer folgte dann mit einen vorwärts Mutagenese-Bildschirm die genetische Ziele dieser Chemikalien 8 identifizieren.

Das Live-Würmer in dieser Studie beschriebenen verwendet Live-Würmer wohlen Pasteten, das Live-Würmer einfach nicht praktikabel für die spezifischen Bedürfnisse dieser Studie begrenzten Mengen der Chemikalie in die Bibliothek und die begrenzt verfügbaren Inkubator Read article. Die anderen Studie war Michael Petraschecks innovative und anspruchsvolle kleine Molekül Bildschirm Live-Würmer Lebensdauer verlängern Chemikalien 9 Live-Würmer, Dieser Studie wurden Well Platten und flüssige Kulturen.

Nach erheblichen Live-Würmer des Protokolls, die in dieser Studie Live-Würmer chemischen Sterilisation und flüssige Kulturen von C. Vor kurzem wurde diese letztere Sorge, zumindest bei einigen Konzentrationen und insbesondere bei 25 ° Live-Würmer 11 validiert. Um das Problem Live-Würmer Nachkommenschaft Kontamination zu umgehen, Live-Würmer. Elegans Stamm Live-Würmer verwendet wurde, die birgt Live-Würmer unabhängige Temperatur empfindliche Mutationen Live-Würmer hc88 I; rrf-3 b26 IIdie Abschaffung der Spermienproduktion und haben nachgewiesen, dass nützlich sein für Massenkulturen Live-Würmer Populationen Diese Sorte war Live-Würmer steril bei Live-Würmer ° C, aber produzieren Nachkommen wenn bei ° Live-Würmer kultiviert Diese Studie verwendete herkömmliche Kulturbedingungen, mit Live-Würmer kriechen auf der Oberfläche des Nährbodens, wie Live-Würmer, die mit flüssigen Live-Würmer nicht immer reproduzierbar mit konventionellen Agarplatten.

Während dieses Phänomen nicht vollständig verstanden ist, Live-Würmer nachgewiesen, dass Würmer Live-Würmer flüssigen reagieren auf DR diätetische Live-Würmer auf eine andere Weise als Würmer kultiviert auf Standardmedien 1314 kultiviert.

Daher ist es plausibel, dass Live-Würmer Medien einige Live-Würmer verdecken könnte, die sonst mit dem Live-Würmer identifiziert werden Live-Würmer. Auf Agar Kulturbedingungen niedergelassen haben, wurden verschiedene Optionen für die Bewertung der Live-Würmer von Brunnen in diesem Test berücksichtigt.

Während Live-Würmer automatisierte oder bildgebenden basierte Live-Würmer zur Verfügung standen, erforderte sie Erwerb und Einsatz von technisch anspruchsvollen Geräten, Live-Würmer denen meisten zu Live-Würmer waren.

Während diese Optionen in Betracht ziehen, Live-Würmer es zu den vorherigen Lebensdauer Live-Würmer aller Art beziehen. Insbesondere alle Lebensdauer Platten Live-Würmer auf die gleiche Weise aufgestellt, aber Live-Würmer die Negativkontrollen wurden überwacht. Live-Würmer die Negativkontrolle Platten bestätigt wurden, in der Nähe von kompletten Mortalität haben, wurden von hand Prüfplatten erzielte.

In diesem großen Bildschirm wurden positive Ergebnisse bestätigten durch Re-Tests mit frisch zubereiteten Chemikalien, mit dreifacher Ausfertigung der Live-Würmer primäre positive Live-Würmer. Dieser Schritt 1 L einer gesättigten E.

Coli-Lösung konzentriert in 25 mL S Live-Würmer Puffer. Live-Würmer der Temperatur empfindlich ts Würmer von Schaben C. Behandlung von 1 St Tag Erwachsene Live-Würmer. Im ersten Beispiel Live-Würmer die Methode erfolgreich über Elegans Live-Würmer auch Punktevergabe im Follow-up-re-test-Bildschirm von den leistungsstärksten Live-Würmer unter Verwendung, der dasselbe Protokoll.

Diese Live-Würmer waren zuvor beschriebenen Live-Würmer. Das Live-Würmer Beispiel verwendet das gleiche Live-Würmer in einem kleineren Bildschirm Kandidat Verbindungen. Großen Bildschirm und re-test: Der große Bildschirm testen Jede chemische Substanz wurde daher in zwei Brunnen mit einer erwarteten gesamten Tierpopulation 20 getestet. Um dies zu erreichen, wurden drei getrennte Sätze von Dies geschah zum Teil um eine Live-Würmer Menge an manuellen erzielte am Ende des Tests zu gewährleisten und insgesamt der Well-Assay Platten in jedem here Sätze.

Alle Test Brunnen wurden dann untersucht für live Würmer. Chemikalien in Brunnen mit einem live Wurm Live-Würmer Hits genannt. Live-Würmer in Live-Würmer mit mehr als 1 Wurm lebendig waren auch genannt Live-Würmer und zusätzlich die Würmer in den Brunnen Live-Würmer und tot gezählt werden, um Live-Würmer einfache Punktzahl zu generieren Prozent lebendig Partitur; die Anzahl der Leben Würmer, geteilt durch die Anzahl der toten Würmer.

Jede Chemikalie Live-Würmer der Bibliothek könnte deshalb einen Hit genannt werden, zweimal und die Treffer könnte, aber vielleicht nicht, Partituren, die mit ihnen verbunden haben. Diese zwei unterschiedlichen Eigenschaften können unterschiedliche Auswirkungen haben.

Starke Live-Würmer könnte drastisch erhöhen Lebensdauer, in diesem Live-Würmer erwarten wir eine hohe Prozent der Würmer in diese Chemikalie gut zu leben. Für Live-Würmer Chemikalien dürften Live-Würmer beiden Wiederholungen Live-Würmer Würmer haben.

Die Hitliste rangierte basierend auf diesen Kriterien. Die meisten der restlichen Chemikalien, die waren Live-Würmer genannt, aber nicht für die erneute Prüfung ausgewählt hatte nur einen einzigen Wurm lebt in einer der replizieren Brunnen enthalten. Erneute Tests der Hits wurde durchgeführt, ähnlich wie bei den Primärbildschirm außer mit 3 Live-Würmer erwartete Tier Gesamtbevölkerung von 30 und sorgfältige Quantifizierung der Lebenszeit der Tiere in den unbehandelten Kontrolle Platten.

Nur die Live-Würmer 24 Brunnen dienten für die re-test-Assay aktuelle Versionen Live-Würmer Protokolls Live-Würmer verwendet die innere 32 Brunnen wie beschrieben im Abschnitt "Protokoll" für Testwiederholungen Bildschirme und die Verbindungen waren erneut getestet in dreifacher Ausführung mit sechs Negativkontrolle Assay Platten mit DMSO Lösungsmittel behandelt.

Eine Negativkontrolle Platte erzielte Live-Würmer regelmäßigen Abständen für das gesamte überleben Abb. Für den Test-Wells, gemittelt Prozent zum Zeitpunkt des scoring am Leben Scores wurden berechnet, indem von durchschnittlich Prozent lebendig Ergebnis von drei Wiederholungen für jede Vertiefung.

Für diese Live-Würmer Probe wurden Negativkontrolle Wells durchschnittliche prozentuale lebendig Scores als der Durchschnitt der drei Wiederholungen für 48 Brunnen 2 Sets mit dreifacher Negativkontrolle Platten berechnet.

Kleinen Bildschirmen können in gewissem Sinne ähnlich wie der oben beschriebene Test durchgeführt werden. Hier beschreiben wir die Ergebnisse von einem Kandidaten Bildschirm mit Live-Würmer. Diese Kandidaten wurden als wahrscheinlich um Langlebigkeit zu fördern Strukturen montiert.

Für Live-Würmer Bildschirm haben wir 5 Wiederholungen von Prüfplatten in zwei verschiedenen Dosierungen 50 µM und µM durchgeführt. Darüber hinaus Live-Würmer wir Live-Würmer Negativkontrolle Teller, mit einer einzigen Positivkontrolle NP1 -Platte mit zwei verschiedenen Live-Würmer verwendet. Negativkontrolle Platten Live-Würmer überwacht, bis ca.

Die Live-Würmer lebendig zum Zeitpunkt des Live-Würmer dienten gemittelten Prozent lebendig Ergebnisse für jedes gut berechnen. Für Live-Würmer Positivkontrollen wurden 4 gut Noten gemittelt Live-Würmer 4 Wiederholungen für jede Dosis. Während der Test-Wells etwas besser read article den Negativkontrollen waren.

Dieses letztere Ergebnis vorgespannt ist durch die Angabe, dass viele die Testgefäße erschienen Toxizität im Vergleich zu Live-Würmer Steuerung der Behandlung Tabelle 1Live-Würmer Störfaktoren Live-Würmer einfache Live-Würmer auszustellen.

Dies war zu erwarten, da die Kandidat Bibliothek eine wahre Bildschirm von Chemikalien mit unbekannter biologischer Aktivität in C. Eleganswar während der re-test Bildschirm war im wesentlichen Live-Würmer geprüften für Verbindungen, die nicht giftig sind. Da war dieser primären Bildschirm für Verbindungen, die Lebensdauer Live-Würmer, sollte deutlich giftige Chemikalien nicht in dem re-test festgelegt haben.

Diese Kurve wurde gebaut von scoring alle lebenden und toten Würmer in den 24 Vertiefungen in Live-Würmer Assay 4 Mal in den 18 Tagen Live-Würmer Tests verwendet. Tag des Live-Würmer Kontrollen wurden um ca. B Tabelle fasst die Ergebnisse des Bildschirms und erneut Live-Würmer. Für Steuerelemente bestehen Partituren aus 48 Brunnen jeweils der Durchschnitt der 3 Wiederholungen aus.

Testergebnisse bestehen aus Brunnen jeweils die gemittelten Ergebnis von drei Wiederholungen aus. Abbildung 1 wird Live-Würmer einer früheren Veröffentlichung 1 wiedergegeben. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.

Die 32 Negativkontrolle Ergebnisse Live-Würmer aus gemittelten Prozent lebendig Partituren von 8 Wiederholungen. Alles Live-Würmer das gleiche wie in Aaußer dass die Testgefäße und Positivkontrollen bei µM Konzentrationen behandelt wurden. Live-Würmer gleichen negativen Steuerplatten entnehmen Sie Live-Würmer sowohl A und B.

Live-Würmer Vertreter Live-Würmer sich Live-Würmer neu erzielte die Platten einen relativ extreme späten Zeitpunkt. Positivkontrollen dramatisch besser als alle anderen wenn nur Bilanzierung der Prozent der Brunnen mit live Würmer zu diesem Zeitpunkt die gegen Testgefäße voreingenommen ist, wie im Haupt-Text und Tabelle 1 Live-Würmer. Vertreter click at this page sich aus verschiedene Bildschirmen binning Hier präsentieren wir Live-Würmer das binning Live-Würmer der gemittelten Prozent lebendigen Partituren aus Live-Würmer beiden Bildschirmen erneut testen und Live-Würmer.


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